Иммуногистохимическое исследование при раке молочной железы

Как проводится иммуногистохимическое исследование?

ИГХ проводят в специальных лабораториях, оборудованных для автоматизированного или ручного анализа.  Для верификации диагноза «рак молочной железы» проводится биопсия подозрительного участка. На молочной железе маркером отмечаются места для прокола.

При помощи тонкой иглы онколог достигает новообразования в молочной железе и проводит забор биоптата. Также для исследования используют материал, полученный во время операции.

Тонкий срез материала помещают на предметное стекло и фиксируют при помощи парафина. Затем препарат окрашивают и добавляют к нему меченные антитела. Такой подход позволяет обнаружить опухолевые клетки и разнообразные опухолевые факторы, которые невозможно было бы обнаружить при другом исследовании. В этом и состоит основное достоинство метода.

Цель  исследования – подробное изучение рецепторов злокачественных клеток, их строения, ферментов, гормонов, структуры, иммуноглобулинов и прочих биологических веществ.

Вся полученная информация дает цельное представление об  опухолевой клетке. Специалисты оценивают ее функциональное состояние, работу системы апоптоза (запрограммированного старения поврежденных клеток) и уточняют межклеточное взаимодействие.

Результат ИГХ имеет решающее значение при выборе тактики лечения, а также позволяет оценить прогноз состояния пациента.

Какие задачи в онкологии помогает решать иммуногистохимия?

Иммуногистохимический анализ помогает врачам-онкологам:

  • Отнести злокачественную опухоль к тому или иному типу.
  • Выяснить, в каких генах опухолевых клеток произошли мутации, какие белки способствуют прогрессированию рака.
  • Выявить первичную опухоль и ее метастазы.
  • Определить, произошла ли злокачественная трансформация клеток.
  • Определить прогноз для пациента.
  • Разобраться, поможет ли в данном случае таргетная терапия.
  • Определить, чувствительны ли опухолевые клетки к химиотерапии, лучевой терапии.

Иммуногистохимическое исследование при раке молочной железы: анализ и расшифровка

Иммуногистохимическое исследование при раке молочной железы (ИГХ) – лабораторный способ изучения тканей, полученных с помощью биопсии. Методика иммуногистохимии применяется чтобы:

  • определить характер и тип патологии;
  • выявить чувствительность, а также устойчивость клеток опухоли к тем или иным вариантам химиотерапии или радиотерапии;
  • обнаружить источник рака, если имеются метастазы неясного генеза;
  • установить степень распространения ракового процесса;
  • узнать гистогенетическое происхождение заболевания;
  • оценить успешность проведённого лечения;
  • диагностировать пролиферацию новообразования;
  • определить нозологический вариант раковой опухоли.

Противопоказаний процедура ИГХ практически не имеет. Проблемы с проведением анализа возникают лишь при невозможности забора образцов повреждённых клеток по причине труднодоступной локализации онкообразования.

Иммуногистохимическое исследование при раке молочной железы

Для проведения иммуногистохимического исследования нужна поражённая опухолью ткань. Обычно ее получают при выполнении биопсии или после проведения операции.

Взятый образец помещают в формалин и отправляют в лабораторию. Там его обезжиривают, заливают специальным парафином. Потом выполняют микротомирование – делают тонкие срезы до 1 мкм с парафиновых блоков.

Их раскладывают на специальных стёклах. Лишь потом начинают процедуру.

Выполняется окрашивание исследуемого материала определёнными реактивами в необходимой концентрации. Для анализа может применяться малая панель – с набором из 5 разновидностей антител или большая панель – насчитывающая от 6 типов маркеров.

От количества HER2 рецепторов зависит цветовая комбинация реактивов с опухолевыми клетками. Чем их больше имеется в исследуемом образце, тем интенсивнее окраска. Результаты анализа ИГХ обычно готовы в течение 1-2 недель. Точность иммуногистохимии зависит от субъективного восприятия результатов гистологом.

Расшифровка анализа

Иммуногистохимия отображает концентрацию HER2-белка (рецептора человеческого эпидермального фактора роста) в патологическом образце. Благодаря ему в здоровом организме контролируется нормальный процесс деления и самовосстановления клеток.

Почти у 25 % женщин с карциномой молочной железы рецептор человеческого эпидермального фактора роста производит чрезмерное количество HER2. Потом клетки начинают неконтролируемо расти и делиться. Итоги иммуногистохимического исследования HER2 статуса при карциноме грудной клетки интерпретируют в зависимости от интенсивности окраски по специальной шкале:

  • 0-1 обозначает, что HER2-белок обнаружен в нормальном количестве и раковая опухоль негативная (75% ситуаций). Необходимости на этом этапе заболевания в медикаментозных препаратах нет;
  • 2 подтверждает среднюю концентрацию HER2-белка в исследуемом материале и наличие отрицательной карциномы груди;
  • 3 сигнализирует, что фиксируется превышение выработки HER2-белка, а онкологическое образование положительное (25%).

HER2 позитивный рак груди характеризуется агрессивным вариантом течения. Опухоль увеличивается намного быстрее, чем при HER2 негативной карциноме. В 30% случаев HER2-положительный вариант с течением времени преобразовывается в HER2 — отрицательный.

Иммуногистохимическое исследование при раке молочной железы

Если после исследования подтверждается положительный HER2, то доктор может назначить лечение препаратами Лапатаниб и Герцептин. Эти медикаменты используются лишь при позитивной форме HER2. Они прикрепляются к белку HER2, не позволяют ему достичь злокачественных клеток и стимулировать их рост. Не рекомендуется применение Лапатаниба и Герцептина для лечения негативной карциномы груди.

Если опухоль оценена на 2 , то желательно провести ещё один анализ. Полученный результат не всегда правдиво обозначает превышение показателей HER2-белка.

FISH-тест бывает либо положительный (нормальное количество HER2) либо отрицательный (амплификация генов).

При выполнении ИГХ учитывается также процентное соотношение Ki-67, характеризующее злокачественность ракового процесса. Если при диагностированной карциноме груди Ki-67 – 15%, то прогноз, скорее всего, будет благоприятным. Если Ki-67 достигает 30% и более, то опухоль считается высокоагрессивной.

Только специалист должен ставить точный диагноз на основании результатов расшифровки иммуногистохимии и при необходимости, итогов других анализов.

Иммуногистохимическое исследование – эффективная, высокоинформативная и достаточно новая методика дифференциального диагностирования онкологических опухолей, которая помогает определить её гистогенез на клеточном уровне.

При подозрении на опухолевидное образование у пациента врач назначает ряд стандартных обследований.

Диагноз злокачественного поражения может быть выставлен только на основании оценки изменений в биоптате – иммуногистохимическое исследование (ИГХ) считается одним из самых достоверных способов обнаружения опухолевых клеток.

Суть иммуногистохимического исследования – это изучение под микроскопом образцов биологического материала, то есть тканей, полученных путем биопсии.

Предварительно ткани обрабатываются определенными специфическими антителами.

Рак и сами раковые клетки являются объектами всестороннего исследования уже несколько десяток лет.

В ходе этих исследований ученым удалось установить, что опухолевидные клетки продуцируют специфические белки или как еще их называют – антигены.

Эти белки имеют способность связываться с антителами. Именно на этом и построен принцип ИГХ – забранная у пациента ткань для исследования обрабатывается рядом стандартных антител и проводится исследование под микроскопом.

Если антитела вступают во взаимодействие с раковыми клетками, то у них появляется свойство флуоресценции, то есть возникает свечение, отличающееся разной длиной волны. То есть если подобное изменение в исследуемом биоптате обнаружено, то можно уже с большей долей вероятности выставлять злокачественное образование.

На сегодня разработаны и активно используются антитела к большинству самых распространенных новообразований.

Иммуногистохимическое исследование позволяет:

  • Определить вид новообразования и его подвид.
  • Установить, насколько распространен по организму первичный раковый очаг.
  • Определить источник метастазов, если биоптат получен из вторичных очагов рака.
  • Оценить насколько эффективно проводимое лечение пациентов с онкозаболеваниями.
  • Установить стадию злокачественного новообразования.
  • Выяснить пролиферацию опухолей, то есть установить скорость роста новообразований.

ИГХ считается более информативным методом по сравнению с более привычным гистологическим. Но в некоторых случаях необходима именно гистология, поэтому желательно использовать оба анализа.

Метод ИГХ может применяться для исследования практически любых тканей в организме человека. Назначается этот вид исследования в основном, если имеется подозрение на развитие опухолевого процесса.

Иммуногистохимическое исследование используется:

  • Для определения типа первичных, в основном одиночных, новообразований.
  • Для выявления метастазов.
  • Когда необходимо определить прогноз развития и течения опухолей.
  • Как метод исследования рецепторов к ряду гормонов.
  • Для определения типа лимфопролиферативных состояний.
  • Для обнаружения микроорганизмов.

Противопоказаний к ИГХ нет. Этот анализ невозможно провести только в том случае, если возникают непреодолимые трудности при заборе образцов поврежденных тканей.

ИГХ проводится в несколько этапов, самый первый это долаборатоный, то есть забор тканей для анализа.

Образец получают путем биопсии, в некоторых случаях возможно отщипывание кусочка тканей или их изъятие при проведении эндоскопической или хирургической операции.

Как будет получен биологический материал, зависит от локализации новообразования и от его вида. Забранный материал помещают в формалин и только после этого направляют в лабораторный центр.

В лаборатории образец ткани подвергают нескольким изменениям:

  • Материал обезжиривают и заливают парафином. Таким образом, получаются гистологические блоки, хранить их можно вечно, поэтому и ИГХ можно при необходимости повторять.
  • Следующий этап микротомирование – получение тончайших срезов с шириной до 1,0 мкм с парафиновых блоков. Срезы распределяют на специальных стеклах.
  • Полученные срезы окрашиваются иммуногистохимическими препаратами, то есть растворами антител в определенной концентрации. Может использоваться для исследования малая панель – в нее входит 5 видов антител. Большая панель содержит от 6 и до десятков видов маркеров. Какие антитела будут вступать во взаимодействие с опухолевыми клетками, зависит от предполагаемого вида новообразования.

Результаты проведенного ИГХ становятся известны в течение 7-15 дней.

Для определения рака молочных желез были выведены определенные иммуногистохимические маркеры. При подозрении на злокачественное образование обязательно количество таких рецепторов, как эстроген и прогестерон.

Избыток этих гормонов провоцирует рост злокачественного образования и влияет на появление метастаз. ИГХ на предмет экспрессии прогестеронов и эстрогенов позволяет точнее установить стадию заболевания и выяснить показано ли в этом случае гормональное лечение.

Иммуногистохимическое исследование при раке молочной железы

Опухоли с высокой концентрацией гормонов в большинстве своем не отличаются повышенной активностью и успешно лечатся антигормональными препаратами.

При уровне в 30% говорят о быстрой скорости развития опухоли, прекращение ее роста происходит под влиянием химиотерапии. Если показатель меньше 30%, то лечение пациентов проводится гормональными средствами.

Обследование больных позволило установить, что если Ki-67 меньше 10%, то выживаемость приближается к отметке в 95%. При уровне этого показателя в 90% летальный исход наблюдается практически в ста процентах.

Игх эндометрия

Иммуногистохимическое исследование тканей эндометрия назначается:

  • При бесплодии.
  • При частом невынашивании беременности.
  • Пациенткам с несколькими неудачными попытками ЭКО.
  • При диагностике хронической формы эндометрия.

Как это работает?

Иммуногистохимия бывает прямой и непрямой. В первом случае используют один вид антител, которые должны вступить в связь с определенной молекулой-мишенью. Если молекула-мишень присутствует в ткани, и реакция произошла, опухолевая ткань окрашивается:

  • Чаще всего к антителу присоединяют фермент, например, пероксидазу. Этот фермент катализирует химическую реакцию, которая приводит к изменению цвета.
  • Иногда к антителу присоединяют флюоресцин или родамин, при этом окрашивание выявляют с помощью флюоресцентной микроскопии.
  • всего применяют непрямую иммуногистохимию. При этом используют два антитела. Одно соединяется с антигеном, второе — с полученным комплексом антиген-антитело. Маркер, который вызовет изменение цвета, связывают со вторым антителом.

Непрямой метод имеет некоторые преимущества:

  • Он обладает более высокой чувствительностью, потому что с одним первичным антителом (тем, которое связывается с белком-мишенью) может связаться несколько вторичных антител.
  • Исследование занимает немного времени: для того, чтобы произошла реакция, нужно примерно 3 часа.
  • Непрямая иммуногистохимия требует небольшого количества антител. Например, вторичное антитело, направленное на иммуноглобулины кролика, будет реагировать на любое первичное антитело «кроличьего» происхождения. Не нужно создавать много разных видов вторичных антител с окрашивающей или флуоресцентной меткой.

Как проводят исследование?

Для того чтобы выполнить иммуногистохимический анализ, нужно получить опухолевую ткань, то есть провести биопсию. В качестве материала можно использовать столбик ткани, полученный во время трепан-биопсии, фрагмент тканей или даже целый орган, удаленный во время операции.

Образец ткани фиксируют с помощью формальдегида (иногда используют метанол, ацетон и другие фиксаторы — это зависит от того, какой антиген нужно выявить, и реагирует ли он с теми или иными фиксаторами) и погружают в парафин. Парафинизация помогает законсервировать ткань, сохранить ее структуру на длительное время.

Затем ткань, помещенную в парафин, нарезают с помощью специального инструмента — микротома — на слои толщиной 3–5 мкм. Эти тонкие срезы помещают на стекло, покрытое, специальным клеем.

Некоторые образцы слишком чувствительны к реагентам, которые применяют во время вышеописанной процедуры. Их нельзя помещать в парафин. Такие ткани замораживают жидким азотом. Этим альтернативным методом пользуются редко, только в случае необходимости, так как у заморозки есть некоторые недостатки: она делает изображение под микроскопом не таким четким, требует специальных условий хранения образцов. Фиксацию ткани в таких случаях проводят уже после нанесения на стекло и размораживания, ацетоном или формальдегидом.

После того как срезы нанесены на стекло, из них нужно удалить весь парафин, иначе антитела не прореагируют с антигеном. Эта процедура называется депарафинизацией. Ее проводят с помощью ксилола. Затем выполняют еще некоторые подготовительные процедуры, чтобы антитела могли успешно прореагировать с нужными антигенами, и, наконец, проводят непосредственно иммуногистохимический анализ. Обработанную антителами ткань рассматривают под микроскопом, чтобы проверить, окрасилась ли она.

Расшифровка результатов

Оценка всех результатов обследования проводится целостно лечащим онкологом. Учитывая данные визуального осмотра пациента, сопутствующую патологию и данные лабораторных и инструментальных методов исследования. Ни в коем случае ИГХ-анализ не может быть расшифрован в отрыве от пациента или самостоятельно. Доверьте свое здоровье профессионалам!

Постоянное контролирование новых ИГХ-маркеров рака молочной железы в процессе анализа помогает назначать самое подходящее в данной конкретной ситуации лечение и давать прогноз пациенту на будущее.

В настоящее время, несмотря на большое количество маркеров, у пациентов чаще всего определяют рецепторы к гормонам ki-67 и her-2-neu.

При расшифровке иммуногистохимического анализа рака молочной железы учитывают чувствительность рецепторов к эстрогену, или ER (ЕР), а также к прогестерону, или PR (ПР). Также процедура показывает содержание HER-2 белка в биоматериале, увеличенный уровень которого приводит к обнаружению карциномы.

Если в опухоли находят рецепторы к половым гормонам, можно сказать, что она подвержена действию PR и ER — является гормонозависимой. Но только при условии, что уровень этих гормонов в организме на нормальном или высоком уровне.

Иммуногистохимическое исследование при раке молочной железы

Также при расшифровке результатов ИГХ при раке молочной железы используется специальная шкала:

  • 3 — показатель указывает на высокую концентрацию белка, обнаруживается положительное новообразование.
  • 2 — указывает на среднюю концентрацию белковых клеток, что указывает на злокачественную карциному груди. Для уточнения используют тест FISH, которое расширяет ИГХ путем изучения каждой клетки. Если HER2 содержится в норме, результат будет положительным, а при повышении – отрицательным.
  • 0-1 — результат говорит о нормальной концентрации белка.

Положительные опухоли с максимальным количеством баллов развиваются агрессивнее других.

Далее изучаются показатели маркера Ki67, в норме который не превышает 17%. Если уровень достигает 35%, это указывает на быстрый рост опухоли, значит, требуется химиотерапия. Если процент достигает показателя в 85%, лечение уже не будет эффективным – смертельного исхода не избежать.

Иммуногистохимическое исследование при раке молочной железы

Клинико-патоморфологическая характеристика молекулярных подтипов рака молочной железы

Процедура иммуногистохимии позволяет выявить один и 4 типов рака. Расшифровка ИГХ исследования при раке молочной железы:

  • Люминальный А рак. Рецепторы положительны к эстрогену, но отрицательны к белку, а Ki76 находится на уровне до 14%.
  • Люминальный Б тип. Рецепторы к эстрогену и HER2 отрицательны, а Ki67 имеет коэффициент более 15%.
  • Ebr B2 сверхэкспрессирующий. В этом случае гормоны будут отрицательны, а белок – положительным.
  • Базальноподобный. Присутствует отрицательное значение к гормонам и другим факторам.

Процедура иммуногистохимии – высокоточная методика обнаружения и изучения опухолей, с помощью которой можно выявить наличие или отсутствие рака и определить все элементы новообразования. Цена иммуногистохимического исследования при раке молочной железы достаточно велика и может достигать нескольких десятков тысяч рублей. Однако это самый эффективный из существующих методов обозначения злокачественных процессов.

Какие молекулы-мишени выявляют во время иммуногистохимии?

Количество возможных мишеней измеряется сотнями. Перед исследованием врач должен понимать, что он ищет, и использовать соответствующие антитела. В онкологии мишенями являются опухолевые маркеры — вещества, которые в здоровых клетках отсутствуют вообще или присутствуют в значительно меньшем количестве. Вот некоторые примеры:

  • Рецепторы к эстрогенам и прогестерону помогают идентифицировать гормонально-позитивный рак молочной железы и разобраться, помогут ли женщине гормональные препараты.
  • Простатспецифический антиген (ПСА) имеет значение в диагностике рака простаты.
  • Альфа-фетопротеин — присутствует в гепатоцеллюлярной карциноме (рак печени).
  • Цитокератины помогают в диагностике рака и некоторых сарком (злокачественных опухолей соединительной ткани).
  • Фермент CD10 (CALLA) связан с карциномой почек, лимфобластным лейкозом.

Вывод

Иммуногистохимическое исследование безусловно играет важную роль в диагностике рака молочной железы. Но при этом, его нельзя считать основным.

Основным принципом профилактики и ранней диагностики рака молочной железы была и  остается ежегодная диспансеризация женщин старше 45 лет, а также онкологическая настороженность докторов. В объем скрининга входит маммография и обязательная консультация врача – маммолога.

Компания «Русский доктор» помогает своим пациентам попасть на прием к лучшим специалистам в своей области. Позвоните нам или оставьте заявку на сайте для подробной информации.

Мы желаем вам долгих лет жизни и крепкого здоровья!

Ваш «Русский доктор»

Какова роль иммуногистохимии в современной онкологии?

Иммуногистохимический анализ помогает изучить характеристики злокачественной опухоли, которые не могут выявить другие методы диагностики. Зачастую это играет важную роль в уточнении диагноза и назначении правильного лечения. Врач может определить, какие комбинации препаратов будут наиболее эффективны для конкретного больного, иными словами, реализуется принцип персонализированного лечения. Зачастую это помогает улучшить результаты, подобрать эффективное лечение для пациентов, которым не помогает стандартная терапия.

Прогностические факторы предоставляют информацию о возможном поведении рака молочной железы на момент его диагностики и не зависят от терапии. То есть с помощью них можно судить, как будет быстро прогрессировать рак и, соответственно, в зависимости от этого принять решение, какой объем и лечение предпочтительны в каждой конкретной ситуации.

В свою очередь, “предиктивные” (предсказывающие) факторы обеспечивают информацией, которая позволяет судить о вероятности ответа опухоли на конкретную терапию. Несмотря на то, что прогностические и предиктивные факторы возможно систематизировать по отдельности, в диагностике и классификации рака молочной железы чаще они являются как прогностическими, так и предиктивными.

Например, наличие высокой экспрессии HER2. Если рак молочной железы her2 положительный (большое количество в опухоли белка HER2), то он протекает агрессивно, с ранним метастазированием в отдаленные органы. А если опухоль содержит малое количество этого белка (рак молочной железы her2 негативный), она не будет реагировать на применение таргетного препарата герцептина.

Рекомендуем прочесть статью о том, что такое

люминальный рак молочной железы

. Из нее вы можете узнать, как современные методы исследования помогают определить подтипы рака, как выбирают оптимальный метод лечения рака молочной железы в зависимости от результатов исследования.

Существует подразделение рака молочной железы в зависимости то того, какие гены экспрессируют его клетки (профиль экспрессии генов). Опухоли, профиль которых характерен для базальных или миоэпителиальных клеток нормальной молочной железы, будут показывать наличие «базальных» маркеров. Такие опухоли имеют неблагоприятный прогноз. В большинстве из этих «базальных» опухолей полностью отсутствуют ER, PR (рецепторы к эстрогену и прогестерону) и белок HER2. Они часто метастазируют в головной мозг, в легкие.

Иммуногистохимическое исследование при раке молочной железы

На сегодня нет консенсуса по иммуногистохимическому профилю (какие ИГХ маркеры должны применяться), который бы четко определял эти «базальные» раки. К этим опухолям с плохим прогнозом относится и так называемый «трижды негативный рак молочной железы», в котором отсутствуют ER, PR и HER2, но экспрессируются базальные цитокератины 5/6 и 14, рецептор эпидермального фактора роста (EGFR) и C-KIT. Они могут также экспрессировать P-кадгерин и часто p63.

Есть сходство между «базальным» раком молочной железы и раками, которые выявляются у женщин с BRCA1 мутацией.

EGFR экспрессируется часто в «базальных» раках, поэтому пациентки с такими опухолями могут извлечь пользу при лечении ингибиторами EGFR.

Количество митозов или процент клеток, находящихся в митозе, давно считается морфологическим «биомаркером» прогноза рака. Существует ряд ИГХ маркеров, которые демонстрируют пролиферативную активность клеток (количество митозов):

  • Ki67 — антиген, который экспрессируется в ядрах клеток на всех этапах клеточного цикла и является полезным маркером клеточной пролиферации;
  • MIB1 — антитело, которое реагирует с Ki-67 в ткани, зафиксированной формалином или парафином;
  • PPh3.

Апоптоз или «запрограммированный суицид клетки» является биомаркером агрессивных опухолей. Белки апоптоза можно идентифицировать с помощью ИГХ:

  • р53. Мутации в гене р53 супрессора опухолей (TP53) выявляются в 20-30% случаях рака молочной железы. Эти генные мутации наблюдаются чаще у женщин с наследственными синдромами рака молочной железы, чем у женщин с спорадическим раком. Для пациентки с генетической предрасположенностью к раку молочной железы может быть рекомендовано р53-тестирование. Обнаружение мутаций в р53 также рассматривается в качестве возможного предсказателя ответа рака молочной железы на химиотерапию, но обнаружение белка р53 иммуногистохимически в опухоли не отражает статус мутации р53.
  • Топоизомераза II альфа. Это мишень, на которую направлено действие антрациклина — химиотерапевтического препарата, который часто используется в лечение рака молочной железы.
  • Определение ki-67 при раке молочной железы

    Так, 5-летняя выживаемость рака молочной железы при индексе Ki-67 ниже 10% составляет 95%, а когда выше этого уровня — падает до 80%.

  • Первая стадия рака молочной железы: клиника…

    Прогноз рака молочной железы 1 стадия благоприятый, пятилетняя выживаемость у женщин с этим диагнозом — 100%.

  • Рак молочной железы 3 стадии: клиника, лечение, прогноз

    «Неоперабельный» рак молочной железы — это не означает, что он не лечится. Онкологи 3 стадию молочной железы делят на «операбельный» и…

Поделиться:
Нет комментариев

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Все поля обязательны для заполнения.

Adblock
detector